Brazilian Journal of Pathology and Laboratory Medicine

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Evaluation of the interference of platelets in reticulocyte counting by flow cytometry using thiazole orange

Karina Augusta Viana; Olindo A. Martins Filho; Luci Maria S. Dusse; Lis R. V. Antonelli; Danielle M. V. Avelar; Renato S. Avelar; Maria das Graças Carvalho
J. Bras. Patol. Med. Lab. 2016;52(3):142-148
DOI: 10.5935/1676-2444.20160025

ABSTRACT

INTRODUCTION: The reticulocyte count by flow cytometry (FC) – an automated counting method – can present errors due to the presence of interfering factors, contributing to a slight increase in results. However, automated methods have large advantages over the manual method, taken as reference, what justifies efforts to improve their quality.
OBJECTIVE: Evaluate platelet interference with the reticulocyte count by FC, using thiazole orange (TO) (FC/TO).
MATERIALS AND METHODS: The method of reticulocyte count by FC/TO and a modified automated equivalent method, which excluded CD61-positive cells (platelets) from analysis (FC/TO/MOD), were compared to the manual method.
CONCLUSION: Results were analyzed according to the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) to assess interchangeability between the methods, by linear regression analysis and paired t-test. The exclusion of interfering fragments from result analysis by the modified method produced results in closer proximity to those of the reference method.

Keywords: reticulocyte count; flow cytometry; blood platelets.

RESUMO

INTRODUÇÃO: A contagem de reticulócitos por citometria de fluxo (CF) – um método de contagem automatizada – pode apresentar erros devido à presença de interferentes, contribuindo para uma ligeira elevação dos resultados. No entanto, os métodos automatizados possuem grandes vantagens em relação ao manual, tido como referência, o que justifica esforços para a melhoria de sua qualidade.
OBJETIVO: Avaliar a interferência de plaquetas na contagem de reticulócitos por CF, utilizando laranja de tiazol (thiazole orange [TO]) (CF/TO).
MATERIAIS E MÉTODOS: O método de contagem de reticulócitos por CF/TO e um método equivalente automatizado modificado, no qual se excluíram células CD61-positivas (plaquetas) da análise (CF/TO/MOD), foram comparados com o método manual.
CONCLUSÃO: Os resultados foram analisados de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para avaliar a intercambialidade entre os métodos, por meio da análise de regressão linear e do teste t pareado. A exclusão de interferentes da análise dos resultados pelo método modificado demonstrou maior proximidade dos resultados com aqueles do método de referência.

Palavras-chave: contagem de reticulócitos; citometria de fluxo; plaquetas.

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