A quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of anti-double-stranded DNA IgG antibodies

Elisângela O. Cavalcante; Lisandra A. Suzuki; Claudio Lucio Rossi
J. Bras. Patol. Med. Lab. 2019;55(2):160-169
DOI: 10.5935/1676-2444.20190018

ABSTRACT

INTRODUCTION: The detection of anti-double-stranded (ds) deoxyribonucleic acid (DNA) antibodies is one of the classification criteria for diagnosing systemic lupus erythematosus (SLE).
OBJECTIVE: To describe a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting anti-dsDNA immunoglobulin class G (IgG) antibodies.
METHODS: The performance of ELISA was evaluated using the Crithidia luciliae indirect immunofluorescence test (CLIFT) as a reference. Anti-dsDNA IgG antibodies were screened by ELISA and CLIFT in serum samples from 127 patients with SLE, 56 patients with other diseases and 37 healthy persons. The Cochran Q test was used to compare the sensitivity and specificity of the reactions, with differences among the results being considered significant when p ≤ 0.05.
RESULTS: ELISA had a sensitivity of 92.9% and a specificity of 94.6%, whereas the sensitivity and specificity of CLIFT were 85.8% and 100%, respectively. ELISA was significantly more sensitive than CLIFT (p = 0.0027), whereas CLIFT was significantly more specific than ELISA (p = 0.0253).
CONCLUSION: ELISA showed excellent results in terms of sensitivity and specificity, with a potential use in research and routine diagnostics.

Keywords: systemic lupus erythematosus; antinuclear antibodies; enzyme-linked immunosorbent assay; indirect fluorescent antibody technique.

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: La detección de anticuerpos contra el ácido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena (dc) es uno de los criterios de clasificación para el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES).
OBJETIVO: Describir una técnica inmunoenzimática (ELISA) cuantitativa para detección de anticuerpos de inmunoglobulina de clase G (IgG) anti-ADNdc.
MÉTODOS: Se evaluó el desempeño de la técnica ELISA mediante el test inmunofluorescencia indirecta con Crithidia luciliae (IFI-CL) como referencia. Anticuerpos IgG anti-ADNdc fueron analizados por ELISA y IFI-CL en muestras de sueros de 127 pacientes con LES, 56 pacientes con otras enfermedades y 37 personas sanas. La prueba Q de Cochran fue utilizada para comparar la sensibilidad y la especificidad de las reacciones considerando diferencias significantes entre los tests cuando p ≤ 0,05.
RESULTADOS: La técnica ELISA mostró sensibilidad del 92,9% y especificidad del 94,6%, mientras la sensibilidad y la especificidad de la técnica IFI-CL fueron del 85,8% y 100%, respectivamente. La técnica ELISA mostró sensibilidad significativamente mayor que la obtenida con IFI-CL (p = 0,0027); esta mostró especificidad significativamente mayor que la obtenida con ELISA (p = 0,0253).
CONCLUSIÓN: La técnica ELISA presentó resultados excelentes de sensibilidad y especificidad, con el potencial de ser utilizada en investigación y rutina diagnóstica.

Palabras-clave: lupus eritematoso sistémico; anticuerpos antinucleares; ensayo de inmunoadsorción enzimática; técnica del anticuerpo fluorescente indirecta.

RESUMO

INTRODUÇÃO: A detecção de anticorpos contra o ácido desoxirribonucleico (DNA) nativo (ds) é um dos critérios de classificação para o diagnóstico do lúpus eritematoso sistêmico (LES).
OBJETIVO: Descrever uma técnica imunoenzimática enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) quantitativa para a detecção de anticorpos imunoglobulina da classe G (IgG) anti-DNAds.
MÉTODOS: O desempenho da técnica ELISA foi avaliado utilizando o teste de imunofluorescência indireta com Crithidia luciliae (CLIFT) como referência. Anticorpos IgG anti-DNAds foram pesquisados por ELISA e CLIFT em amostras de soros de 127 pacientes com LES, 56 pacientes com outras doenças e 37 indivíduos sadios. O teste Q de Cochran foi utilizado para comparar as sensibilidades e as especificidades das reações, considerando diferenças significantes entre os testes quando p ≤ 0,05.
RESULTADOS: A técnica ELISA apresentou sensibilidade de 92,9% e especificidade de 94,6%, enquanto a sensibilidade e a especificidade da técnica CLIFT foram de 85,8% e 100%, respectivamente. A técnica ELISA apresentou sensibilidade significativamente maior do que a obtida com a técnica CLIFT (p = 0,0027); esta apresentou especificidade significativamente maior do que a obtida com a técnica ELISA (p = 0,0253).
CONCLUSÃO: A técnica ELISA apresentou excelentes resultados em termos de sensibilidade e especificidade, podendo ser útil em pesquisa e rotina diagnóstica.

Palavras-chave: lúpus eritematoso sistêmico; anticorpos antinucleares; ensaio de imunoadsorção enzimática; técnica indireta de fluorescência para anticorpo.