Performance validation of western blot for anti-HIV antibody detection in blood samples collected on filter paper (DBS)

Marcia J. Castejon; Rosemeire Yamashiro; Carmem Aparecida F. Oliveira; Maria Amélia S. M. Veras
J. Bras. Patol. Med. Lab. 2017;53(1):5-12
DOI: 10.5935/1676-2444.20170002

ABSTRACT

INTRODUCTION: For conducting field studies on human immunodeficiency virus (HIV) serodiagnosis, the use of samples collected on filter paper [dried blood spot (DBS)] is profitable owing to the simplicity in handling and delivering them. Because of these characteristics, the use of DBS is recommended for studies in which the goal is to increase the population access to diagnostic testing, including HIV infection screening. For HIV diagnosis, the conventional strategy firstly uses an enzyme immunoassay as screening test, and the positive sample is confirmed on a complementary assay, as western blotting (WB).
OBJECTIVE: This study aimed at evaluating the analytical performance of WB assay for analyzing DSB samples.
METHOD: One hundred eighteen blood samples collected in filter paper were analyzed by a modified WB. These samples derived from the SampaCentro Study, and they were HIV-antibody-positive in a screening test. In order to assess the reliability of these results, the assay performance was previously certified by employing the sample panel (reference panel) of Instituto Adolfo Lutz (IAL), which consisted of whole blood and plasma paired samples.
RESULTS: All of the DBS samples [100% (118/118)] showed the band pattern compatible with the criterion for HIV positivity established by the Ministry of Health. To validate the WB testing, the reciprocal relationship between antibody reactivity of DBS samples and of the respective plasma samples was investigated.
CONCLUSION: WB optimization allowed the achievement of accurate results, and the easy DBS sample collection, transportation and storage will support the use of this immunodiagnostic technique for conducting HIV/acquired immunodeficiency syndrome (Aids) epidemiological surveys.

Keywords: HIV antibodies; western blotting; validation studies; dried blood spot testing; Aids serodiagnosis.

RESUMO

INTRODUÇÃO: Em estudos de campo é vantajoso o emprego de amostras coletadas em papel de filtro (DBS) pela simplicidade em manuseá-las e transportá-las. Essas características colocam a tecnologia de DBS em posição de destaque nas pesquisas que buscam aumentar o acesso da população aos testes diagnósticos, incluindo os testes sorológicos para vírus da imunodeficiência humana (HIV). A estratégia convencional para o diagnóstico da infecção pelo HIV é utilizar um teste imunoenzimático como primeiro teste e, quando este for reagente, um teste complementar, como o western blot (WB), para confirmar a reatividade da amostra.
OBJETIVO: Neste estudo foi avaliado o desempenho analítico do ensaio WB em amostras DBS.
MÉTODO: As 118 amostras de sangue coletadas em papel-filtro, provenientes do estudo SampaCentro e reagentes para anticorpos anti-HIV no ensaio de triagem, foram analisadas no WB modificado. Para conferir a confiabilidade a esses resultados, o desempenho do ensaio foi previamente validado por meio de painel de amostras do Instituto Adolfo Lutz (IAL) (painel de referência), composto por amostras pareadas de sangue total e plasma.
RESULTADOS: Todas as amostras DBS [100% (118/118)] apresentaram o padrão de bandas compatível com o critério de positividade para HIV preconizado pelo Ministério da Saúde. Na validação do WB, foi averiguada a reciprocidade da reatividade dos anticorpos das amostras DBS e de suas respectivas amostras de plasma.
CONCLUSÃO: A otimização do WB possibilitou a obtenção de resultados confiáveis, e a facilidade de execução, coleta, transporte e armazenamento de amostra DBS poderá viabilizar a utilização dessa técnica imunodiagnóstica em inquéritos epidemiológicos de HIV/síndrome da imunodeficiência adquirida (Aids).

Palavras-chave: anticorpos anti-HIV; western blotting; estudos de validação; teste em amostras de sangue seco; sorodiagnóstico da Aids.